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流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用 | 漂亮完成細(xì)胞因子檢測(cè)

時(shí)間:2019/5/23閱讀:203
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實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介

細(xì)胞因子在淋巴細(xì)胞免疫功能調(diào)節(jié)方面發(fā)揮重要作用,它可以調(diào)節(jié)多種細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化和功能,調(diào)節(jié)正常與病理狀態(tài)下的免疫應(yīng)答。研究生理或病理免疫調(diào)節(jié)因素導(dǎo)致細(xì)胞因子合成的應(yīng)答與改變是探尋疾病病因與免疫狀態(tài)關(guān)系的重要工具。

本實(shí)驗(yàn)采用優(yōu)化的一管 8 色的多色檢測(cè)方案對(duì)人外周血 T 細(xì)胞亞群的 IFN-γ、IL-17、 顆粒酶、穿孔素表達(dá)情況進(jìn)行了研究。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖上可看出,本實(shí)驗(yàn)在 CytoFLEX 上檢測(cè)時(shí)各細(xì)胞群體分群明顯,檢測(cè)結(jié)果確切可信,能夠非常漂亮地完成此類實(shí)驗(yàn)。

材料與方法

? 試劑

 

? 樣品制備

Sample Type外周血單個(gè)核細(xì)胞
Species
Age of specimen樣本染色后 1 h 之內(nèi)完成上機(jī)檢測(cè)
Prep Method

1. 取 200 ul 全血加 200 ul1640,并加入適量 PMA 等試劑,刺激 4 h;

2. 混勻后去 100 ul 刺激后的標(biāo)本并加入相應(yīng)膜抗,室溫避光孵育 20 min;

3. 加固定液,孵育后離心去上清;

4. 加入適量生理鹽水,1500 rpm 轉(zhuǎn)速下離心 5 min 去除上清液;

5. 加破膜液混勻,并加入相應(yīng)胞漿抗體適量,混勻后室溫避光,孵育 20 min;

6. 加入適量生理鹽水,1500 rpm 轉(zhuǎn)速下離心 5 min 去除上清液;

7. 重復(fù) 6;

8. 加入 300-500 ul 預(yù)冷的 PBS,混勻后上機(jī)檢測(cè)。

數(shù)據(jù)分析

使用 CD45/SSC 設(shè)門,選取淋巴細(xì)胞群(設(shè)邏輯門排除掉混雜的單核細(xì)胞),然后再取 CD3+T 淋巴細(xì)胞;分 別分析 Th 細(xì)胞與 TS 細(xì)胞的相關(guān)因子的表達(dá)情況。

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