時(shí)間沒(méi)有等我，是你忘了帶我走 ，我左手過(guò)目不忘的的螢火，右手里是十年一個(gè)漫長(zhǎng)的打坐。轉(zhuǎn)眼2019年已經(jīng)接近尾聲了，關(guān)于免疫組化問(wèn)題，上海古朵生物一一為您解答
1、染色過(guò)強(qiáng)
原因及相關(guān)解決方法
a 抗體濃度過(guò)高或孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng) 降低抗體滴度、抗體孵育時(shí)間：室溫1小時(shí)或4度過(guò)夜
b 孵育溫度過(guò)高超過(guò)37度 一般在室溫20-28度
c DAB顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或濃度過(guò)高 顯色時(shí)間不超過(guò)5-12分鐘，以顯微鏡下觀察為準(zhǔn)
2、非特異性背景染色
原因及相關(guān)解決方法
a 操作過(guò)程中沖洗不充分： 每步?jīng)_洗3次每次5分鐘
b 組織中含過(guò)氧化物酶未阻斷 ：可再配置新鮮3%H2O2封閉孵育時(shí)間延長(zhǎng)
c 組織中含內(nèi)原性*：正常非免疫動(dòng)物血清再封閉
d 血清蛋白封閉不充分：延長(zhǎng)血清蛋白封閉時(shí)間
3、染色弱
原因及相關(guān)解決方法
a 抗體濃度過(guò)低、孵育時(shí)間過(guò)短：提高抗體濃度、孵育時(shí)間不能少 于60分鐘
b 試劑超過(guò)有效使用時(shí)間： 應(yīng)更換試劑
c 操作中添加試劑時(shí)緩沖液未瀝干 ：每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液
使試劑稀釋 (應(yīng)防止切片干燥)
d 室溫太低 ：低于15度要改放在37度孵育箱孵育30-60分鐘或4 度冰箱過(guò)夜
e 蛋白封閉過(guò)度：封閉不要超過(guò)12分鐘
4、染色陰性
原因及相關(guān)解決方法
a 操作步驟錯(cuò)誤：應(yīng)重試設(shè)陽(yáng)性對(duì)照
b 組織中無(wú)抗原：設(shè)陽(yáng)性對(duì)照以驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果
c 一抗與二抗種屬連接錯(cuò)誤：仔細(xì)確定一抗二抗種屬無(wú)誤
上海古朵生物是一家專(zhuān)業(yè)從事“產(chǎn)品研發(fā)生產(chǎn)、市場(chǎng)銷(xiāo)售、技術(shù)服務(wù)”為一體的高科技生物技術(shù)公司，公司生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量有保證，含量高，能夠給實(shí)驗(yàn)帶來(lái)準(zhǔn)確的結(jié)果。如有需要可咨詢我司銷(xiāo)售人員，我們將竭誠(chéng)為您服務(wù)。
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