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植物表皮生長因子酶聯(lián)免疫操作步驟

時(shí)間：2020/1/8閱讀：448
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　　植物表皮生長因子（EGF）酶聯(lián)免疫分析操作步驟
 
　　1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
 
　　2.加樣：分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
 
　　3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
 
　　4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
 
　　5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
 
　　6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
 
　　7.溫育：操作同3。
 
　　8.洗滌：操作同5。
 
　　9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
 
　　10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
 
　　11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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