氧化磷酸化系列/NADH輔酶Q測試盒/(微量法)是上海酶聯(lián)生物為您精心研發(fā)用于實驗方法的生化試劑盒產(chǎn)品，也是您科研路上的好幫手，產(chǎn)品說明資料歡迎您來電索取。

氧化磷酸化系列/NADH輔酶Q測試盒/(微量法)

產(chǎn)品規(guī)格 : 100管/96樣

測試方法：微量法

產(chǎn)品分類：氧化磷酸化系列

產(chǎn)品品牌：mlBio/酶聯(lián)生物

產(chǎn)品包裝：液體盒裝

運輸條件：快遞包郵

應(yīng)用范圍：僅供科研研究使用

保存條件：低溫避光保存

有效期：６個月

說明書 : 咨詢或電詢客服索取

供應(yīng)商：上海酶聯(lián)生物科技有限公司

注    意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

氧化磷酸化系列/NADH輔酶Q測試盒/(微量法)

測定意義：
復(fù)合體Ⅰ（EC 1.6.5. 3）又稱NADH-CoQ 還原酶或NADH脫氫酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中，是線粒體內(nèi)膜中 的蛋白復(fù)合物。該酶催化一對電子從NADH傳遞給CoQ，同時可使O2還原生成O2.-，是呼吸電子傳遞鏈上產(chǎn)生O2.-的主要部位。測定該酶活性，不僅可以反映呼吸電子傳遞鏈（ETC）狀態(tài)，而且可以反映活性氧（ROS）生成狀態(tài)。
測定原理：
復(fù)合體Ⅰ能夠催化NADH脫氫生成NAD+，在340nm下測定NADH的氧化速率計算出該酶活性的大小。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理：
組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
①準(zhǔn)確稱取0.1g組織或收集500萬細(xì)胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
②將勻漿600g，4℃離心5min。
③棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
④上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白，可用于測定從線粒體泄漏的復(fù)合體Ⅰ（此步可選做）。
⑤步驟④中的沉淀即為線粒體，加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10秒，重復(fù)30次），用于復(fù)合體Ⅰ酶活性測定。