質(zhì)粒小量提取試劑盒
英文名稱
Plasmid Extraction Mini Kit
規(guī)格
50T ; 100T
儲(chǔ)存條件
酶附件-20℃，其它試劑RT
有效期
1年
單位
盒

質(zhì)粒小量提取試劑盒

質(zhì)粒小量提取試劑盒  

本試劑盒采用堿裂解法裂解細(xì)胞，根據(jù)離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結(jié)合溶液中的DNA的原理特異性提取質(zhì)粒DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料能高效、專一地吸附DNA，可最大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。 使用本試劑盒提取的質(zhì)粒DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測(cè)序、連接和轉(zhuǎn)化等試驗(yàn)。

      使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無(wú)水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶體上的標(biāo)簽。溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA（將試劑盒中提供的 RNaseA 全部加入），混勻，置于 2-8℃保存。如非指明，所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。

注意事項(xiàng):

 1、使用前請(qǐng)先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現(xiàn)混濁，如有混濁現(xiàn)象，可在 37℃水浴中加熱幾分鐘，待溶液恢復(fù)澄清后再使用。溶液Ⅱ、溶液Ⅲ、漂洗液使用后應(yīng)立即擰緊蓋子。 

2、洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于 50μL，體積過(guò)小影響回收效率；洗脫液的 pH 值對(duì)洗脫效率也有影晌，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)至此范圍)，pH 值低于7.0 會(huì)降低洗脫效率，DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防 DNA 降解。 

3、如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)?；虼笥?10kb 的大質(zhì)粒，應(yīng)加大菌體使用量，使用 5-10mL 過(guò)夜培養(yǎng)物，同時(shí)按照比例增加溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量，吸附和洗脫時(shí)可以適當(dāng)?shù)难娱L(zhǎng)時(shí)間，以增加提取效率。

 4、DNA 濃度及純度檢測(cè)：得到的質(zhì)粒 DNA 純度與樣品保存時(shí)間、操作過(guò)程中的剪切力等因素有關(guān)。得到的 DNA 可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。DNA 應(yīng)在 OD260處有顯著吸收峰，OD260 值為 1 相當(dāng)于大約 50ug/mL 雙鏈 DNA、40ug/mL 單鏈 DNA。OD260/OD280 比值應(yīng)為 1.7-1.9，如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會(huì)偏低，因?yàn)?pH 值和離子存在會(huì)影響吸光值，但并不表示純度低。