【儀器網(wǎng) 使用手冊(cè)】高效液相色譜儀主要用于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定的和分子量較大的有機(jī)化合物。該儀器主要由溶劑輸送系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)(色譜柱)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理與記錄系統(tǒng)組成,廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、食品科學(xué)、藥物研究及環(huán)境研究等領(lǐng)域。
工作原理:
儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入檢測(cè)系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)過(guò)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱內(nèi),由于樣本溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí),經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的“吸附-解吸”的分配過(guò)程,各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出,通過(guò)檢測(cè)器時(shí)樣本濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式輸出檢測(cè)結(jié)果。
使用時(shí)的常見問(wèn)題:
1、渦流擴(kuò)散
如果柱裝填不均勻,流動(dòng)相的速度就快;有的部位結(jié)塊或裝直緊密則流動(dòng)速度就慢,多條流路有快有慢就會(huì)使區(qū)帶變寬。因此固相載體的顆粒要小而均勻,裝柱要松緊均一,渦流擴(kuò)散小,柱效率高。
2、分子擴(kuò)散
分子擴(kuò)散就是物質(zhì)分子由濃度高的區(qū)域向濃度低的區(qū)域運(yùn)動(dòng),也稱縱向分子擴(kuò)散。若要減少分子擴(kuò)散就要采用小而均勻的固相顆粒裝柱。同時(shí)在操作時(shí),如果流速太慢被分離物質(zhì)停留時(shí)間長(zhǎng),則擴(kuò)散嚴(yán)重。
3、質(zhì)量轉(zhuǎn)移
被分離物質(zhì)要在流動(dòng)相與固定相中平衡,這樣才能形成較窄的區(qū)帶。液相色譜中,溶質(zhì)分子要在兩個(gè)液相之間進(jìn)行分配或在固相上被吸附和解吸附均需要一定的時(shí)間。流速快時(shí),轉(zhuǎn)移速度慢,來(lái)不及達(dá)到平衡動(dòng)相就會(huì)移動(dòng),這種物質(zhì)的非平衡移動(dòng)會(huì)使區(qū)帶變寬。
4、動(dòng)相流速
當(dāng)流速太低時(shí),分子擴(kuò)散嚴(yán)重,特別是在氣相色譜中尤為突出。如果將理論塔板高度對(duì)流速作圖,理論塔板高度隨流速增加而快速下降,達(dá)到低值時(shí),流速再加大則質(zhì)量轉(zhuǎn)移起主要作用,理論塔板高度又加大。在高效液相色譜中,流速稍快影響不大,但在凝膠過(guò)濾色譜中,因?yàn)槲镔|(zhì)要滲透到凝膠內(nèi)部,所以質(zhì)量轉(zhuǎn)移影響大,流速加大會(huì)降低柱效率。
5、固定相顆粒大小
固定相顆粒越小柱效率越高,對(duì)流動(dòng)相流動(dòng)的阻力越大,需要加大壓力才能使它流動(dòng)。
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