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革蘭氏染色法指的是細菌學(xué)中被廣泛用來鑒別細菌的一種方法。最初是一位丹麥醫(yī)生漢斯·克里斯蒂安·革蘭用來鑒別肺炎球菌和克雷白氏肺炎菌，在后續(xù)不斷推廣下，現(xiàn)在成為了鑒別細菌種類的重要特性之一。通過觀察染色后的細菌，根據(jù)染色后細菌呈現(xiàn)的顏色可以分為革蘭氏陽性細菌和革蘭氏陰性細菌，陽性細菌呈紫色，陰性細菌呈紅色，并且還能夠清楚地觀察到細菌的的形態(tài)、排列組合以及某些結(jié)構(gòu)特征的不同，通過這些特性再進行分類鑒定。
革蘭氏染色法的染色原理是由于陽性細菌和陰性細菌的細胞壁組成結(jié)構(gòu)和成分上有所差異，染色體的反應(yīng)也不同，陽性菌的細胞壁肽聚糖層厚，其肽聚糖網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)之間交聯(lián)緊密，經(jīng)過乙醇脫色處理后會發(fā)生脫水情況，導(dǎo)致陽性菌的孔徑縮小，使得通透性能降低，結(jié)晶紫與碘形成的大分子復(fù)合物就會保留在細胞壁內(nèi)不脫色，細胞最終呈現(xiàn)紫色；陰性菌的肽聚糖層比較薄，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)之間的交聯(lián)松散，且脂類含量高，經(jīng)過乙醇脫色處理后，乙醇將類脂溶解，細胞壁的孔徑變大，通透性增強，細胞壁上會出現(xiàn)較大的縫隙，使結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物容易溶出細胞壁，導(dǎo)致細胞脫色，細胞呈無色狀態(tài)，這時再用紅色染料對細胞進行復(fù)染，革蘭氏陰性細菌最終呈紅色狀態(tài)。
革蘭氏染色的實驗步驟
1.制片：選取菌種培養(yǎng)物中常規(guī)涂片，干燥后再進行固定，步驟與簡單染色法相同；
2.初染：滴加草酸銨結(jié)晶紫，染色1-2min后進行水洗；
3.媒染：用碘液去除殘留的水分，并用碘液覆蓋約1min后再進行水洗；
4.脫色：用濾紙將殘水吸去，滴加95%的酒精，大約25-30s，直到乙醇不再流出紫色時，立刻進行水洗；
5.復(fù)染：用番紅液復(fù)染1-2min，再次水洗；
6.鏡檢：標(biāo)本片干燥后，用油鏡進行觀察，菌體被染成紅色的即為革蘭氏陰性菌，被染成紫色的即為革蘭氏陽性菌。
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