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全自動(dòng)凱氏定氮儀作為測(cè)定蛋白質(zhì)的重要儀器，廣泛應(yīng)用于乳與乳制品等農(nóng)產(chǎn)品和食品中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定。它具有高靈敏度、分析速度快、應(yīng)用范圍廣、所需試樣少、設(shè)備和操作比較簡(jiǎn)單等特點(diǎn)，下面來(lái)介紹凱氏定氮儀的使用經(jīng)驗(yàn)。
1、開(kāi)機(jī)之前
保證各個(gè)溶液能夠滿(mǎn)足此次試驗(yàn)測(cè)定，檢查去離子水，堿液和接收液的使用情況，以及廢液桶中廢液得到了及時(shí)的清理。如果在去離子水，堿液和接收液的液位低于液位傳感器的話(huà)，或廢液的液位高于液位傳感器的話(huà)，儀器將報(bào)警，正在進(jìn)行的試驗(yàn)將被停止，影響測(cè)定工作的正常進(jìn)行。
2、開(kāi)機(jī)之前，保證冷卻水的開(kāi)關(guān)是打開(kāi)了。
如果冷卻水開(kāi)關(guān)關(guān)閉，儀器雖然能自檢通過(guò)，但是在蒸餾過(guò)程中，由于蒸餾裝置的溫度太高，儀器將報(bào)警，提示打開(kāi)冷卻水開(kāi)關(guān)。打開(kāi)冷卻水開(kāi)關(guān)后，儀器將繼續(xù)工作。但此次試驗(yàn)被停止，影響正常測(cè)定的同時(shí)，在沒(méi)有冷卻水保護(hù)的情況下，對(duì)蒸餾裝置具有損傷。
3、等1.1和1.2確認(rèn)無(wú)誤后開(kāi)機(jī)，儀器自檢，自檢通過(guò)后，儀器進(jìn)入等待選擇程序階段。
首*入手動(dòng)模式對(duì)滴定器中的氣泡進(jìn)行排除。氣泡的存在會(huì)影響測(cè)定結(jié)果，因?yàn)闅馀葸M(jìn)入后，會(huì)占據(jù)標(biāo)準(zhǔn)滴定酸的體積，使標(biāo)準(zhǔn)滴定酸的體積減小，測(cè)定結(jié)果偏低。
排除氣泡的方法是：
首先打開(kāi)儀器前蓋，儀器報(bào)警，提示儀器前蓋被打開(kāi)，找一塊小磁鐵放在儀器前面的觸點(diǎn)上，按面板上回車(chē)鍵，此時(shí)儀器默認(rèn)前蓋關(guān)閉。將儀器功能選擇滴定器充液，滴定器活塞向上移動(dòng)停止后，用收捏住滴定器的塑料軟管，選擇滴定器排空，滴定器活塞向下移動(dòng)，等移動(dòng)3~5秒后立刻松手，滴定器中氣泡將上浮至滴定器上端，選擇滴定器充液，氣泡被排除滴定器，反復(fù)2~3次，將氣泡排凈后開(kāi)始測(cè)定。
4、空白的測(cè)定
在空白測(cè)定時(shí)，首先測(cè)定水空白，水空白的測(cè)定是為了檢查儀器的穩(wěn)定程度。當(dāng)前后兩次空白測(cè)定值小于0.05且水空白值小于0.2時(shí)，儀器穩(wěn)定。測(cè)定試劑空白，并將空白值輸入儀器。如果不先測(cè)定水空白而直接測(cè)試劑空白，即在儀器不穩(wěn)定的情況下就進(jìn)行試劑空白的測(cè)定，將會(huì)得到偏高的試劑空白值，測(cè)定結(jié)果將偏低。
5、樣品測(cè)定
5.1稱(chēng)樣
牛乳樣品需要混合均勻后取樣，因?yàn)榕Ｈ闃悠啡菀字旧细?，不事先混合而直接從上層取樣的?huà)，測(cè)定結(jié)果將偏低。乳粉樣品混合均勻后用稱(chēng)量紙稱(chēng)量，并用鑷子送如消化管底部。因操作不當(dāng)殘留在管壁上的樣品，在加入硫酸的時(shí)候用硫酸沖入消化管底部。如果殘留在管壁上而不用硫酸沖入的話(huà)，將會(huì)使測(cè)定結(jié)果偏低。
5.2消化
在加酸的過(guò)程中，要考慮到樣品的組成對(duì)消耗酸量的影響。酸量小，樣品消化不*，測(cè)定結(jié)果偏低；酸量大，在上機(jī)過(guò)程中與堿中后酸過(guò)量，游離胺不能被蒸餾出來(lái)，嚴(yán)重影響測(cè)定結(jié)果。
在消化過(guò)程中，先220℃預(yù)消化1小時(shí)，然后將溫度升高到420℃。預(yù)消化的目的是讓樣品和硫酸先緩慢的反應(yīng)。不預(yù)消化，濃硫酸將和樣品在高溫下劇烈反應(yīng)，造成炭化，測(cè)定結(jié)果將偏低，炭化造成的顆粒還會(huì)在排廢過(guò)程中堵塞管路，造成儀器不能正常工作。
6、回收率的測(cè)定
采用硫酸銨和尿素分別對(duì)回收率進(jìn)行測(cè)定。單純的采用硫酸銨，簡(jiǎn)單快速，不要要消化，但只能保證儀器測(cè)定的部分，而不能對(duì)前處理的消化過(guò)程進(jìn)行質(zhì)量體系保證。尿素需要消化進(jìn)行測(cè)定，對(duì)前處理和儀器測(cè)定部分全程進(jìn)行質(zhì)量保證。
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