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標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)一直是藥品質(zhì)量控制特別是純度和含量分析的重要選擇，但標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的供需矛盾，如有些雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)不易獲取以及多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)同時(shí)使用所帶來(lái)的高昂檢測(cè)成本等限制了標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的實(shí)際應(yīng)用。為解決這一問(wèn)題，替代方法應(yīng)運(yùn)而生，高效液相色譜(HPLC)校正因子法便是其中之一。

該方法起初主要用于HPLC有關(guān)物質(zhì)檢查時(shí)對(duì)于特定雜質(zhì)的定量，進(jìn)而又逐漸用于中藥多指標(biāo)含量的測(cè)定，發(fā)展至今相對(duì)校正因子用于雜質(zhì)的定量或者中藥多組分活性成分的定量方法已經(jīng)得到廣泛的應(yīng)用，但是其在使用過(guò)程中還存在一些問(wèn)題需要統(tǒng)一或者規(guī)范，其在中藥方面的應(yīng)用已經(jīng)有多人對(duì)相應(yīng)的技術(shù)要求進(jìn)行過(guò)建議和總結(jié)，但在雜質(zhì)定量研究方面相關(guān)報(bào)道甚少，因此本文將文獻(xiàn)中相對(duì)校正因子在雜質(zhì)定量方面應(yīng)用存在的一些問(wèn)題進(jìn)行了總結(jié)。

曲線是否需要強(qiáng)制過(guò)原點(diǎn)

對(duì)于色譜方法，校正曲線的斜率b=0是一種理想的狀態(tài)，事實(shí)上由于每一臺(tái)儀器都有其檢測(cè)限度，需要待分析物達(dá)到一定濃度水平以后才能檢測(cè)出信號(hào)，以及溶劑干擾等系統(tǒng)誤差的存在，因此截距一般不會(huì)為0。

正的Y軸截距表示高濃度響應(yīng)的飽和度或響應(yīng)處有干擾存在，負(fù)的截距說(shuō)明可能方法靈敏度有問(wèn)題，或被分析物質(zhì)殘留在容器或者HPLC系統(tǒng)中。但是標(biāo)準(zhǔn)曲線法使用斜率求取校正因子的前提是假設(shè)截距b=0，由此可見(jiàn)無(wú)論是否對(duì)截距進(jìn)行校正，這種方法對(duì)于相對(duì)校正因子的測(cè)定都會(huì)產(chǎn)生一定的誤差。

目前對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)曲線法求校正因子的截距和斜率未檢索到明確的要求。因此文獻(xiàn)對(duì)于校正曲線的處理也有兩種方法，一種是將截距校正為0；大部分則未做校正。但校正因子在中藥方面的應(yīng)用中有一些相關(guān)要求的報(bào)道，如校正曲線相關(guān)系數(shù)r不得低于0.999，k/b值大于100時(shí)，b值可以忽略不計(jì)。

實(shí)例證明在中藥多組分含量測(cè)定中采用截距校正后的曲線斜率求相對(duì)校正因子方法最為合理。但截距校正與否對(duì)校正因子計(jì)算會(huì)產(chǎn)生多大的影響，哪一種方式計(jì)算得到的雜質(zhì)含量更為準(zhǔn)確未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。

校正曲線濃度范圍的選擇

在進(jìn)行雜質(zhì)定量方法驗(yàn)證時(shí)，線性驗(yàn)證是方法驗(yàn)證中不可少的一項(xiàng)內(nèi)容，由于在驗(yàn)證過(guò)程中要分別建立雜質(zhì)和主成分濃度和響應(yīng)值之間的校正曲線，可以就此以兩校正曲線的斜率計(jì)算出相對(duì)校正因子，因此很多研究對(duì)于校正曲線濃度的范圍便遵從線性驗(yàn)證的要求從定量限到限度值的120%～150%。也有專家建議標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定校正因子的濃度范圍要涵蓋定量限和標(biāo)準(zhǔn)限度。

從目前檢索到的文獻(xiàn)看，有些文獻(xiàn)的確涵蓋了定量限和標(biāo)準(zhǔn)限度，有些則僅涵蓋限度或未明確定量限，其中一些文獻(xiàn)上限定了限度水平的200%甚至500%，高濃度范圍對(duì)于溶液的配制可能更為簡(jiǎn)單，低濃度范圍則更加接近正常雜質(zhì)檢測(cè)水平，不同濃度范圍所得到校正因子是否有所差別未檢索到文獻(xiàn)報(bào)道。

校正曲線上濃度點(diǎn)的選擇

在計(jì)算相對(duì)校正因子時(shí)，多采用線性驗(yàn)證時(shí)的校正曲線，因此一般要求至少制備5份不同濃度的對(duì)照品溶液用于校正曲線的繪制。在配置不同濃度的對(duì)照品溶液時(shí)應(yīng)盡量采用逐級(jí)稀釋,在校正曲線上的點(diǎn)也應(yīng)均勻分布，也有一些文獻(xiàn)濃度點(diǎn)分布并不均勻，如在低濃度處選點(diǎn)更加密集，曲線上濃度分布對(duì)校正因子的測(cè)定是否產(chǎn)生影響未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。

涉及校正因子的方法開(kāi)發(fā)與驗(yàn)證

目前對(duì)于雜質(zhì)與主成分相對(duì)校正因子的測(cè)定多在進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)方法線性驗(yàn)證時(shí)直接以校正曲線的斜率順帶求得，僅在《中國(guó)藥典》2015年版四部《9101藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則》中明確規(guī)定了校正因子需進(jìn)行準(zhǔn)確度驗(yàn)證，但對(duì)于測(cè)定校正因子的方法開(kāi)發(fā)以及耐用性驗(yàn)證沒(méi)有明確的要求。

在檢索到的有關(guān)化學(xué)藥品具體品種校正因子的26篇相關(guān)文獻(xiàn)中，有16篇文獻(xiàn)在計(jì)算相對(duì)校正因子時(shí)考慮到了儀器、色譜柱的相關(guān)影響，以在不同儀器不同色譜柱上測(cè)定得到的均值作為校正因子；有11篇文獻(xiàn)進(jìn)行了校正因子的耐用性驗(yàn)證，但驗(yàn)證項(xiàng)目不一，主要涉及人員、實(shí)驗(yàn)室、儀器、色譜柱、流動(dòng)相pH值和比例、流速、試劑等級(jí)、柱溫、粒徑等多個(gè)影響因素，其中檢測(cè)波長(zhǎng)、色譜柱、柱溫、流速都被報(bào)道過(guò)對(duì)校正因子測(cè)定結(jié)果有顯著影響。

由此可見(jiàn)，應(yīng)該在方法開(kāi)發(fā)時(shí)對(duì)于特定雜質(zhì)相對(duì)校正因子的耐用性根據(jù)具體情況進(jìn)行全面考察，如果校正因子發(fā)生明顯變化，應(yīng)對(duì)具體測(cè)試條件在方法標(biāo)準(zhǔn)中加以嚴(yán)格設(shè)定，這樣相對(duì)校正因子才能作為一個(gè)常數(shù)，直接載入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)用于雜質(zhì)的準(zhǔn)確定量。

隨著大眾對(duì)于藥品安全性認(rèn)識(shí)和需求的不斷提高，藥品有關(guān)物質(zhì)檢查中進(jìn)行特定雜質(zhì)控制會(huì)逐漸成為藥品質(zhì)控的常態(tài)，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)無(wú)法及時(shí)供應(yīng)的情況下，采用相對(duì)校正因子計(jì)算特定雜質(zhì)的方法也會(huì)越來(lái)越普遍。相對(duì)校正因子將成為藥品HPLC方法中用于雜質(zhì)含量測(cè)定和限度檢查過(guò)程中一個(gè)重要的參數(shù)。