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明明是一瓶的血清偏偏出現(xiàn)沉淀,和血清質(zhì)量有關(guān)嗎？會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)嗎？如何避免沉淀？出現(xiàn)沉淀如何處理？ 一系列大大小小的問題襲來!其實(shí)“血清沉淀，其實(shí)屬于常見現(xiàn)象，并不會(huì)影響血清的品質(zhì)，大家不必驚慌！但很多人對(duì)這一現(xiàn)象還不是很了解。”為此，我們對(duì)“血清沉淀”的幾個(gè)常見問題進(jìn)行了總結(jié)，
血清沉淀是什么？
血清中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)肉眼可見的沉淀，其成分有多種類型，產(chǎn)生的原因有很多，主要有纖維蛋白、磷酸鈣還有一些其它成分。
1. 纖維蛋白(Fibrin)
血清中肉眼可見的沉淀物大多屬于這一類型。由于在生產(chǎn)過程中，血清采集、過濾(3 次 0.1 μm過濾)和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成, 此時(shí)血清中纖維蛋白原(Fibrinogen)處于溶解狀態(tài)。但在解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會(huì)發(fā)生凝集，形成肉眼可見的沉淀。
下圖是血清因反復(fù)凍融而造成纖維蛋白原的凝集
2. 磷酸鈣(Calcium Phosphate)
這是一種常見的沉淀成分，通常會(huì)造成血清出現(xiàn)云霧狀渾濁。當(dāng)產(chǎn)品在 37℃保存時(shí)，這種現(xiàn)象尤其明顯，在倒置顯微鏡下可觀察到小黑點(diǎn)的存在。這些小黑點(diǎn)在布朗運(yùn)動(dòng)的作用下四處游動(dòng)，常被誤認(rèn)為是微生物污染。
3. 其他成分(Other)
血清中的其他成分也會(huì)形成沉淀，例如*形成的油脂滴和其他蛋白沉淀等
血清沉淀會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)嗎？
1. 細(xì)胞生長
我們?cè)诔鰪S前都會(huì)對(duì)血清進(jìn)行一系列質(zhì)檢測(cè)試，確保血清質(zhì)量達(dá)到嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)。血清測(cè)試和細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)也表明，其沉淀成分不會(huì)影響血清作為細(xì)胞培養(yǎng)添加物的表現(xiàn)。這一點(diǎn)得到了眾多客戶和其他血清供應(yīng)商的肯定。解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會(huì)發(fā)生凝集，形成肉眼可見的沉淀。
2. 懷疑污染
磷酸鈣顆粒經(jīng)常會(huì)被當(dāng)成微生物污染而引發(fā)不必要的擔(dān)憂。一般情況下，當(dāng)操作人員融化血清后注意到有霧狀渾濁時(shí)，常將其存放在 4℃冰箱中觀察，并考慮接下來是否繼續(xù)使用。但這樣會(huì)使沉淀進(jìn)一步增多，反而會(huì)使血清更加渾濁，進(jìn)而誤以為存在血清污染。并且，在倒置顯微鏡下，可在血清中觀察到四處游動(dòng)的小黑點(diǎn)(磷酸鈣顆粒的布朗運(yùn)動(dòng))，更容易使人誤以為存在微生物污染。
為防止這類誤解的產(chǎn)生，我們不建議客戶培養(yǎng)血清來驗(yàn)證是否存在污染，而是將血清直接接種在細(xì)菌培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，以觀察是否有細(xì)菌的增殖。并且，進(jìn)行革蘭氏染色，并在油鏡(100 X 10 倍)下觀察可直接確認(rèn)是否存在微生物污染。
怎樣操作可以盡量避免沉淀出現(xiàn)？
1. 正確解凍
首先，應(yīng)按照逐步解凍的方式正確解凍血清：從-20℃取出后，置于 4℃冰箱緩慢解凍，后置于室溫完成解凍。如果直接從-20℃拿到室溫或 37 ℃水浴解凍，則非常容易產(chǎn)生沉淀。在解凍過程中，請(qǐng)注意時(shí)不時(shí)緩慢搖晃瓶子，減少沉淀的產(chǎn)生。為避免反復(fù)凍融，建議您將血清分裝使用。
2. 使用和保存注意事項(xiàng)
血清沉淀很難預(yù)測(cè)和避免，出現(xiàn)沉淀后也無需擔(dān)憂，這并不會(huì)影響血清的品質(zhì)。已知血清沉淀在以下條件下會(huì)有增多的可能：
1) 熱滅活；
2) 37℃培養(yǎng)；
3) 反復(fù)凍融；
4) 伽馬射線照射；
5) 2-8℃長期保存；
6) 長期保存于可自動(dòng)化霜的冰箱中(溫度不穩(wěn)定)。
血清沉淀的形成機(jī)理多種多樣，具體的機(jī)理尚不十分明確。我們尚不能準(zhǔn)確預(yù)測(cè)和控制血清沉淀的產(chǎn)生。目前市面上所有品牌的血清產(chǎn)品都存在沉淀現(xiàn)象，這一點(diǎn)可以在各品牌官fang wang站上關(guān)于沉淀問題的聲明上得到證實(shí)。
出現(xiàn)血清沉淀該如何處理？
我們建議您采用2000 rpm 離心5分鐘，取上清使用就好，比過濾方便，不需要另外準(zhǔn)備濾心和針筒，又不容易污染。
總 結(jié)：
血清產(chǎn)品中出現(xiàn)沉淀屬于常見現(xiàn)象，但不會(huì)影響血清的品質(zhì)，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)而言也是沒有任何問題的，大家可以放心使用！
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